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本生課堂:使用PCR板時防止錯誤的五大技巧
更新時間:2023-07-25瀏覽:670次

  本生課堂:使用PCR板時防止錯誤的五大技巧


  聚合酶鏈式反應(yīng) (PCR) 是生命科學(xué)實驗室中廣為人知的方法之一。PCR 板由的塑料制成,可對收集的樣品或結(jié)果進行出色的處理和分析。它們具有薄而均勻的壁,可提供精確的熱傳遞。在為實時應(yīng)用做準備時,DNA 或 RNA 的微小部分被隔離并儲存在 PCR 板中。PCR 板在熱封方面非常有效,并且還限制了熱量的流動。然而,由于 PCR 板有效且可靠,在處理樣品時容易出錯和不準確。因此,如果您有興趣獲得優(yōu)質(zhì)的PCR板。最好聯(lián)系可靠的 PCR 板制造商。有了這個,您可以確保獲得的價格。以下是一些注意事項,可避免試劑或樣品受到污染,并防止結(jié)果不準確。

  對環(huán)境進行消毒:

  由于存在雜質(zhì),會出現(xiàn)不正確的陽性或陰性結(jié)果,這會讓您懷疑結(jié)果。

  雜質(zhì)和污染物以各種形式出現(xiàn),例如不相關(guān)的 DNA 或化學(xué)添加劑,最終會降低反應(yīng)的效率和有效性。

  有許多方法可以大大降低 PCR 板的污染率。

  使用已滅菌的濾芯吸頭是另一種防止雜質(zhì)通過移液器進入樣品的有用方法。

  提供一套干凈的設(shè)備,包括移液器和架子,專門用于 PCR。這將保證實驗室周圍的雜質(zhì)或污染物轉(zhuǎn)移可忽略不計。

  在移液器、架子和長凳上使用漂白劑、乙醇來擦去污染物。

  為所有 PCR 反應(yīng)分配預(yù)留空間,以進一步減少顆粒污染。

  在每一步都使用干凈的手套并經(jīng)常更換。


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  PCR 板

  檢查模板的濃度和純度。

  應(yīng)保持使用 PCR 分析樣品時使用的工作臺和設(shè)備的清潔度。在分析和處理之前驗證樣品的純度至關(guān)重要。

  通常,分析儀會考慮 DNA 樣本的濃度和純度水平。

  爭取260nm/280nm的吸光度比不得小于1.8。而隨后使用 230nm 和 320nm 之間的波長來識別雜質(zhì)。

  在一個例子中,離液鹽和其他有機化合物在 230nm 的吸收率下被檢測到。同時在 320nm 的吸光度下檢測和驗證 DNA 樣品中的濁度。

  避免 PCR 板與產(chǎn)品過載:

  盡管希望同時運行多個產(chǎn)品,但它會導(dǎo)致 PCR 板的交叉污染。

  用不同的產(chǎn)品使 PCR 板超載會浪費,并且很難確定樣品。

  保留等分 PCR 試劑的記錄:

  連續(xù)冷凍/解凍循環(huán)和頻繁使用等分可能會通過重結(jié)晶損壞 PCR 試劑、酶和 DNTP。

  在準備要分析的樣品時,始終努力監(jiān)控使用的等分試樣的速率。

  優(yōu)選的 LIMS 更適合控制試劑和樣品冷凍或解凍的庫存和數(shù)量。

  選擇最佳退火溫度。

  選擇和使用錯誤的退火溫度是另一種方法 PCR 結(jié)果包含錯誤。

  有時,反應(yīng)并沒有按計劃進行。需要降低退火溫度以促進成功的反應(yīng)。

  然而,降低溫度會增加假陽性和引物二聚體出現(xiàn)的機會。

  在使用 PCR 板時,確認熔解曲線的分析具有重要意義,因為它是選擇正確退火溫度的良好指標。

  引物設(shè)計軟件輔助設(shè)計,提供正確的退火溫度,直接減少 PCR 板中的錯誤。

  PCR板本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

  


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